shRNA/miRNA/gRNA rAAV生产全面服务,中试规模
特点:
-在大多数细胞类型中,包括分裂细胞和未分裂细胞或原代细胞,具有优良的基因传递效率。
——多个血清型(AAV-1、AAV-2、AAV-3、AAV-4、AAV-5、AAV-6、AAV-8、AAV-9、AAV-DJ/8、AAV-DJ).
-持久的转基因表达。
-诱导有效的基因沉默。
大shRNA/miRNA/gRNA AAV顺式载体清单构建具有特异性启动子和报告子的AAV顺式质粒:
用于常规shRNA/miRNA/TuD rAAV生产 |
单启动子shRNA/miRNA AAV顺式载体
|
双启动子shRNA/miRNA rAAV顺式载体
|
Promoterless 巨细胞病毒 CAG H1 U6 Synapsin 哥伦比亚大学 EF1α 铝青铜(1.4) 载脂蛋白e / AAT1 CaMKII ELA1 Enh358MCK cTNT GFAP MBP 风场 英特百奇 αMHC hRPE mIP1 tMCK |
|
Promoterless 巨细胞病毒 CAG H1 U6 Synapsin 哥伦比亚大学 EF1α 铝青铜(1.4) 载脂蛋白e / AAT1 CaMKII ELA1 Enh358MCK cTNT GFAP MBP 风场 英特百奇 αMHC hRPE mIP1 tMCK |
巨细胞病毒 CAG H1 U6 Synapsin 哥伦比亚大学 EF1α CaMKII cTNT GFAP
|
eGFP 招标书 mRFP mCherry tdTOMATO TurboGFP eYFP 金星 卢克 LacZ
|
用于CRISPR/Cas9 rAAV生产 |
单启动子CRISPR/Cas9 AAV顺式载体
|
双启动子CRISPR/Cas9 AAV顺式载体
|
Promoterless U6 H1 巨细胞病毒 CAG CBH Synapsin 哥伦比亚大学 EF1α 铝青铜(1.4) 载脂蛋白e / AAT1 CaMKII ELA1 Enh358MCK cTNT GFAP MBP 风场 英特百奇 αMHC hRPE mIP1 tMCK |
空 CBH U6 H1 sCMV Syn sEF1α CK 0.4 cTNT GFAP 0.6 sSyn 风场 英特百奇 αMHC hRPE mIP1 tMCK CBH |
Cas9 hCas9 SpCas9 hSpCas9 SaCas9 AsCpf1 hAsCpf1 ftCas9 st1Cas9 cjCas9 cdCas9 ciCas9 ncCas9 st3Cas9 nmCas9 mgCas9 nsCas9
|
Promoterless sCMV U6 H1 tRNA Syn sSyn sEF1α CaMKII 0.4 |
巨细胞病毒 sCMV CBH H1 U6 Syn sSyn sEF1α CaMKII 0.4
|
Cas9 hCas9 SpCas9 hSpCas9 SaCas9 AsCpf1 hAsCpf1 ftCas9 st1Cas9 cjCas9 cdCas9 ciCas9 ncCas9 st3Cas9 nmCas9 mgCas9 nsCas9
|
服务描述:
1.合成并克隆shRNA到AAV中独联体向量。
2.飞行员将AAV·HT™293细胞转染至10x150 mm板。
3.收获rAAV,采用先进的2xCsCl超离心纯化,获得临床试验级rAAV载体。
4.脱盐,过滤灭菌,AAV滴定通过qPCR。
我们提供的rAAV血清型:
Aav-1, aav-2, aav-3, aav-4, aav-5, aav-6, aav-7, aav-8, aav-9, aav-php。B, AAV-PHP。eB、AAV-DJ/8和AAV-DJ.
所需材料:NCBI登录#,目标序列,验证siRNA或验证shRNA序列;miRNA accession #, pre-miRNA,成熟miRNA或TuD (tough decoy) miRNA。
周转时间:3.~4周。
可交付成果:>0.1 mL超级纯化体内等级rAAV载体>1E+13 VG/mL*。
请给新客户打折请求报价今天与我们在一起。
我们也提供截断的定制shRNA/miRNA AAV服务请求报价今天与我们在一起。
图1所示。对不同来源的rAAV载体的纯度和传染性进行了比较,结果显示,通过我们先进的双CsCl超离心方法制备的rAAV载体具有超纯度和超传染性(接近临床试验级别)。
A. SDS-PAGE分离不同来源的rAAV载体(共1E+9 VG / lane),然后银染色。Lane 1: GMP生产的CHOP rAAV载体;2车道:采用先进的2xCsCl超离心方法制备的rAAV;Lane 3:来自BCM Vector Core的rAAV;第四道:我们的竞争对手“V”的rAAV;5道:我们的竞争对手C的rAAV;第六道:蛋白质标记。
B.通过先进方法制备的超级传染性rAAV载体双中海ultra-centrifugation.左面板:我们的竞争对手“V”注入小鼠眼的rAAV9-GFP(共5E+9 VG);右图:经高级2xCsCl纯化的rAAV-9-GFP(共5E+9 VG)ultra-centrifugation注射到老鼠的眼睛。
图2。对不同来源的rAAV载体的传染性进行了比较,结果表明采用先进的双CsCl超离心方法制备的超纯化rAAV具有超强传染性。
将不同来源的rAAV1-GFP(总2E+9 VG)注射到小鼠肌肉组织。注射后3周观察GFP荧光。A.竞争对手“V”的rAAV1-GFP;B. rAAV1-GFP,来自我们预先制作的rAAVs库存,通过高级纯化中海ultra-centrifugation两倍。C。定量数据表明,我们的超纯化rAAV (bar 2)比常规CsCl超离心制备的(bar 1)传染性高约9倍。
*最终的病毒产量可能取决于转基因的性质。