腺病毒常见问题
什么是腺病毒？
腺病毒最早是从人类腺样体中分离出来的，这个名字就是由此而来的。腺病毒是中等大小（90�100 nm），非包埋（裸）二十面体病毒，由核衣壳和约36kb长的线性、非分段双链（ds）DNA基因组组成。腺病毒基因分为早期和晚期两个阶段。早期基因为E1、E2、E3和E4。晚期基因为L1、L2、L3、L4和L5。病毒粒子利用其独特的“尖峰”或与衣壳每个penton碱基相关的纤维，通过宿主细胞表面的柯萨奇腺病毒受体连接宿主细胞。人类中有53种以上的血清型。腺病毒可引起人类上呼吸道感染、结膜炎、胃肠炎。腺病毒5型是最广泛的研究。重组腺病毒载体通常会从野生型腺病毒基因组中删除E1和E3基因，导致其复制缺陷，因此可以安全地用作转基因载体。E1加E3约为8.0kb，因此您感兴趣的基因的最大插入大小约为8.0kb，考虑到启动子和Poly A约占1kb，因此最大插入大小约为7kb。腺病毒载体以其较高的转导效率（近100%）、较高的转基因表达水平和广泛的向性，已被广泛应用于基因治疗载体、疫苗生产、基因敲除、膜生产、难表达蛋白和工程抗体等领域。
重组腺病毒安全吗？
重组载体是没有E1和E3基因的复制缺陷的腺病毒。E1和E3基因产物将由E1和E3永生化人肾胚细胞293提供。
腺病毒感染的症状和体征是什么？
腺病毒经常感染气道�这可能出现为�Cold�（例如，喉咙痛，打喷嚏，流鼻涕，咳嗽，头痛，发冷），哮喘或支气管炎。疾病通常持续三到五天，但严重的感染可以持续数周。并发症可包括中耳感染，肺炎或脑膜炎。某些类型的腺病毒会导致其他疾病，如皮疹，结膜炎（粉红色眼）膀胱感染，或肠道感染（例如，腹泻）。
如何诊断和治疗腺病毒感染？
一些腺病毒的实验室测试可用；然而，医生通常从病人身上诊断感染�她的症状。没有腺病毒特异性治疗� 在大多数情况下，免疫系统处理感染。治疗可能包括休息、大量饮水、非处方药（如扑热息痛[Tylenol]）、冷雾加湿器，有时还包括支气管扩张剂。如果发烧持续几天以上，症状恶化，出现呼吸问题，或者没有摄入足够的液体，请就医。严重疾病可能需要住院治疗（如输液、吸氧）或其他治疗（如局部使用类固醇治疗结膜炎）� 免疫系统较弱的患者可能需要专家治疗。
重组腺病毒（RAD）的应用是什么？：
重组腺病毒在许多哺乳动物细胞中表达基因和shRNA，无论是分裂还是非分裂、体外、疫苗研究、基因治疗，由于其高转导效率和广泛的宿主范围，特别适合于短期高水平表达实验。中等大小的扩增适合于组织培养。
病毒颗粒和牙菌斑形成单位（PFU）有什么区别？
根据OD260的读数计算病毒颗粒。它表示解决方案中的病毒总数（活病毒和死病毒）。PFU代表传染性病毒。它是通过计算单层HEK293细胞受10倍连续稀释病毒株感染后的斑块数量来确定的。病毒感染HEK293细胞后，在细胞内繁殖，当病毒达到一定量时，病毒从感染的HEK293细胞中释放出来，感染的细胞破裂、死亡、漂浮。释放的病毒再次感染邻近的红细胞，并重复感染和释放过程，直到斑块形成并计数。对于大多数病毒制剂，VP/PFU比率范围为5:1至100:1。
腺病毒的克隆能力如何？
通过使用（DE1 / E3）腺病毒5型转基因的克隆能力为约7kb加上1kb启动子和聚A.
我怎样才能知道腺病毒是否能在我的细胞模型中正常工作？
腺病毒具有非常广泛的主机范围;它可以感染人和其他哺乳动物细胞系或原代细胞，包括复制以及非复制细胞。事实上，实际上很少是不能感染的细胞系。一些淋巴细胞系可能对腺病毒感染更耐药，因此可能需要高量的病毒来实现足够的感染水平。
为方便起见，我们提供一些标记腺病毒，如Ad-CMV-GFP允许您在系统中进行初步测试。
我感染病毒的最佳浓度是多少？
用于感染细胞的适当量的活性/传染性病毒对于您的实验结果非常重要。如果使用不足的病毒，则不会给予100％的感染。如果使用过多的病毒，它会导致细胞毒性或其他不期望的影响。您应该使用将100％基因递送的最小病毒浓度。这种最佳浓度在细胞类型之间急剧不同。要确定这种最佳浓度的病毒，您可以使用标记腺病毒（例如）在系统中进行导频测试，例如Ad-CMV-GFP。
我们通过将细胞暴露于含病毒的培养基中6-8小时或一夜，测试了多种细胞类型。对于大多数细胞类型，病毒浓度为2x105.〜1x106.PFU（感染单位）/ml培养基产生100%的感染，无明显毒性。但是，我们建议您使用标记病毒测试您的细胞系统。
有几种病毒基因递送系统，包括腺病毒，逆转录病毒和慢病毒。我应该用哪一个用于我的实验？
腺病毒：在大多数细胞类型（包括分裂细胞、非分裂细胞或原代细胞）中100%的基因传递效率。没有与主机系统集成。然而，开发重组腺病毒的方案非常复杂。
逆转录病毒：在大多数细胞类型中效率<30%，需要活跃的细胞分裂。此外，存在整合到宿主基因组的重大风险，导致宿主系统中的基因突变或癌基因激活，这是科学家关注的问题。与腺病毒不同，重组逆转录病毒非常容易开发。
慢病毒：在分裂细胞和非分裂细胞中的效率均<30%。与逆转录病毒一样，存在整合到宿主基因组的重大风险，导致宿主系统中的基因突变或癌基因激活。与逆转录病毒一样，重组慢病毒非常容易开发。
如果你有兴趣将你的特定基因或siRNA导入所有细胞，腺病毒系统是最好的选择。然而，如果您对单细胞水平的研究感兴趣，逆转录病毒系统、慢病毒系统甚至直接转染表达质粒DNA有时可能满足您的需要。
腺病毒载体和腺病毒载体的优缺点是什么？
一般而言，腺病毒载体比慢病毒（<30％）具有最高的转导效率（100％）。在骨骼肌和淋巴细胞的情况下，Letivirus比腺病毒更好。腺病毒可以在很短的时间和基因表达水平随时间衰减最高的转基因表达，另一方面，慢病毒表达缓慢而且持续存在癌症的潜在随机活化。
我将使用腺病毒进行体外实验吗？我需要CSCL或色谱法纯化吗？
组织培养不需要高纯度的腺病毒。中等放大倍数就足够了。体内研究需要CsCl或色谱纯化。
是否有腺病毒感染受体？
是的，古典腺病毒受体被称为Coxsackie和腺病毒受体（汽车）。据信汽车决定腺病毒的热衷。最近的研究表明，存在一些分子如CD46，硫酸乙酰肝素或唾液酸，其也可以介导作为其他腺病毒受体的腺病毒感染。
腺病毒感染CAR阴性细胞吗？
是的。汽车是腺病毒受体之一。除了作为CD46、硫酸乙酰肝素或唾液酸。一个例子是整合蛋白αvβ5。潜在的任何粘附分子可以用作腺病毒受体。
腺病毒感染任何人类细胞系吗？
然而，理论上，腺病毒几乎可以感染任何人类细胞转导效率因细胞而异，取决于腺病毒受体。建议使用AD-CMV-GFP（SL100708）进行试验研究。
哪个细胞最低转导效率还
肌肉淋巴细胞通常是汽车缺陷不易转导。
在神经系统中传递或击倒基因的最佳选择是什么？
重组腺病毒和腺相关病毒（AAV）对中枢神经系统和中枢神经系统的转导效率最高（>75%-97%）外周神经系统，任何非病毒转染试剂无与伦比。腺病毒和AAV可以感染来自神经系统的不同类型的细胞，包括神经元、胶质细胞、视网膜、神经干细胞、，Y79视网膜母细胞瘤细胞，耳蜗毛细胞。腺病毒载体适合于快速、短期表达转基因和基因敲除。对于稳定和长期的基因表达和敲除，AAV是首选。
哪种病毒载体对肌肉细胞和淋巴细胞有益？
Adeno相关病毒有效地将基因转移到非凡的细胞，如肌肉细胞，用于淋巴细胞，转导效率低于肌细胞。
淋巴细胞是慢病毒的天然靶标，因为它来源于人类免疫缺陷病毒（HIV），使慢病毒不如腺病毒和AAV安全。
如何储存腺病毒？
通常来说，一般来说。病毒库存应在收到后等分并储存在-80˚C。病毒应稳定，最多可达到一年左右。避免重复的解冻和冻结，特别是在PBS溶液中的CSCL或色谱纯化后。在补充有血清或BSA的DMEM中储存在-80℃的病毒比纯化的病毒相对较稳定。经过2-3冻融循环后，它将保持稳定。
欲了解更多关于腺病毒的信息，或对腺病毒有任何疑问或意见，请发送电子邮件至tech@188金宝慱亚洲体育APP下载www.gjp158.com
