转染问题 |
可能原因 |
建议的解决方案 |
转染效率低。 |
未使用最佳转染试剂。 |
选择合适的转染试剂可能会为您的细胞类型带来最高的转染效率。点击我们网站上的“支持”标签,查看转染提示。或者,请联系我们的技术支持,网址为tech@188金宝慱亚洲体育APP下载www.gjp158.com |
转染效率低。 |
dna转染试剂复合物形成不良或根本没有形成。 |
在复杂的形成过程中不要使用血清。无血清DMEM推荐用于复杂的形成。虽然我们建议使用含血清的培养基进行转染,但转染复合物必须首先在没有血清的情况下形成。 注意:切勿使用Opti MEM,因为它会破坏转染复合物。 |
转染效率低。 |
抑制剂存在于转染复合物形成过程中。 |
无血清DMEM对转染复合物的形成至关重要。在复杂的形成过程中避免使用以下化学品:高浓度磷酸盐、硫酸软骨素、透明质酸、硫酸右旋糖酐或其他硫酸化蛋白聚糖。 |
转染效率低。 |
冷冻阳离子脂质。 |
不要使用已冷冻的阳离子脂类试剂(LipoD293™,LipoJet™和PowerFect™等)。存储在+4°C。 |
转染效率低。 |
次优的细胞密度。 |
对于DNA转染或DNA/siRNA共转染,细胞在转染时应约70%汇合。对于siRNA转染,细胞密度应在转染时约50%汇合。 |
转染效率低。 |
未使用最佳的转染试剂浓度、DNA浓度、培养时间或细胞密度。 |
根据转染试剂方案优化这些参数。点击我们网站上的“支持”标签,查看转染提示。如需进一步的技术建议,请发送电子邮件至tech@188金宝慱亚洲体育APP下载www.gjp158.com |
转染效率低。 |
转染试验的问题。 |
记得在转染试验中加入阳性对照。 |
转染效率低。 |
转染DNA的启动子增强子不被细胞类型所识别。 |
确保转染的DNA与目标细胞类型兼容。 |
转染效率低。 |
未使用正确的缓冲液稀释GenMute™, GenJet™, PowerFect™ 还有佩普·穆特™ siRNA试剂和siRNA。 |
对于GenMute™, GenJet™, PowerFect™ 还有佩普·穆特™ siRNA试剂,务必使用其预先优化的特定缓冲液稀释这些siRNA试剂和siRNA。 |
转染效率低。 |
在加入细胞培养皿之前,将转染复合物在室温下保持太长时间。 |
对于我们大多数的DNA/siRNA转染试剂,在室温下10~20分钟可形成最佳的复合物。不要将混合物置于室温下超过30分钟。 |
转染效率低。 |
LipoD293™试剂转染时细胞密度太低。 |
使用浓度为~70%的细胞转染LipoD293™试剂。 |
转染效率低。 |
制备转染复合物时旋转速度过快。 |
方案建议通过漩涡将转染试剂与DNA或siRNA混合,然后进行短暂的百分之几次搅拌,将任何液滴拉至试管底部。超过100xg持续5秒可能导致转染复合物沉淀,效率非常低。 |
MDCK、MB2231、SaoS-2等难转染细胞转染效率低。 |
使用了不正确的转染方案。 |
对于GenJet™,LipoD293™和PolyJet™试剂,请在难以转染的细胞上尝试先进的方案,如MDCK, MDA_MB231, SaoS-2等,以获得更好的效率。 |
高细胞死亡(毒性)。 |
太多的DNA。 |
执行剂量-反应曲线以确定最佳DNA量。在剂量反应转染中加入阳离子脂质试剂,因为DNA单独对细胞生长的影响最小。 |
高细胞死亡(毒性)。 |
转染试剂过多。 |
通过量效曲线确定转染试剂的最佳用量。在剂量-反应实验中,将DNA与转染试剂一起使用,因为单独使用转染试剂对细胞生长的影响最小。 |
高细胞死亡(毒性)。 |
细胞密度过低。 |
DNA转染时,细胞密度应达到70%。对于siRNA转染或DNA/siRNA共转染,转染时细胞密度应达到50% ~ 70%汇合。细胞密度低,细胞死亡更严重。 |
高细胞死亡(毒性)。 |
细胞活力下降或严重细胞死亡。 |
我们所有的转染试剂都不受血清和抗生素的干扰,所以在有血清(10%胎牛血清)和抗生素的情况下进行转染。 |
高细胞死亡(毒性)。 |
为了稳定转染,选择抗生素添加得太早。 |
在添加选择性抗生素之前,让细胞至少48小时表达耐药性。 |
高c用PepMute可致死(中毒)™,GenMute™或PepMute™Plus siRNA试剂 |
使用补充有血清(FBS 10%)和抗生素的DMEM细胞培养基。 |
使用DMEM/F12或RPMI 1640基础培养基,添加血清(FBS 10%)和抗生素。PepMute™, 基因沉默™ 和PepMute™Plus siRNA试剂被发现仅在DMEM基础细胞培养基中具有毒性。 |
转染无法复制的。 |
转染时的融合情况有所不同。 |
保持转染参数的一致性和生长阶段的一致性。转染不可复制,细胞在培养过程中发生变化。如果可能,解冻新鲜细胞或获得新的细胞系。 |
转染试剂溶液混浊。 |
储存时温度过低。 |
切勿冷冻转染试剂。GenJet应在+4°C温度下储存™ 系列试剂,只需在37°C下加热试剂几分钟,直到试剂澄清。这不会影响效率。 |
转染复合物的沉淀。 |
存在过量的EDTA。 |
将DNA溶解在水中,而不是溶解在水中。 |
转染复合物的沉淀。 |
复合物形成过程中过量的转染试剂和(或)DNA/siRNA。 |
确保复合物形成中转染试剂和DNA/siRNA的浓度不超过推荐量。 |
siRNA转染时沉默效果差 |
未使用特异性缓冲液稀释转染试剂和siRNA |
给Pepstute™,GenMute™,GenJet™和PowerFect™siRNA转染试剂,我们建议使用其特定的转染缓冲液形成转染复合物,最大限度地沉默。不使用缓冲区将导致较差的静音。 |
siRNA转染时沉默效果差 |
没有使用最佳的siRNA浓度 |
给Pepstute™,GenMute™,GenJet™和PowerFect™siRNA转染试剂,我们推荐使用最终1.0~100 nM的siRNA进行最佳沉默。对于大多数贴壁的哺乳动物细胞,从5.0 nM的siRNA开始(这通常能获得满意的沉默),而对于难以转染的细胞,从50 nM的siRNA开始。 |
DNA/siRNA共转染过程中沉默效果差 |
未使用特异性缓冲液稀释siRNA转染试剂、DNA和siRNA。 |
给Pepstute™,GenMute™,GenJet™和PowerFect™siRNA转染试剂,我们建议使用其特定的转染缓冲液形成转染复合物,最大限度地沉默。 |
DNA/siRNA共转染过程中沉默效果差 |
siRNA浓度过高或过低。 |
给Pepstute™, 基因沉默™, GenJet™ 和PowerFect™ siRNA转染试剂,我们建议使用1.0~20 nM的siRNA进行DNA/siRNA CO0转染。过高的siRNA浓度会产生泛洪效应,而过低的siRNA浓度不足以产生良好的沉默。 |