shRNA/miRNA/gRNA rAAV生产全面服务，中等规模
特点:
-在大多数细胞类型中，包括分裂细胞和未分裂细胞或原代细胞，具有优良的基因传递效率。
——多个血清型(AAV-1、AAV-2、AAV-3、AAV-4、AAV-5、AAV-6、AAV-8、AAV-9、AAV-DJ/8、AAV-DJ)．
-持久的转基因表达。
-诱导有效的基因沉默。
大shRNA/miRNA/gRNA AAV顺式载体清单构建具有特异性启动子和报告子的AAV顺式质粒:
用于常规shRNA/miRNA/TuD rAAV生产 |
单启动子shRNA/miRNA AAV顺式载体
 |
双启动子shRNA/miRNA rAAV顺式载体
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Promoterless
巨细胞病毒
CAG
H1
U6
Synapsin
哥伦比亚大学
EF1α
铝青铜(1.4)
载脂蛋白e / AAT1
CaMKII
ELA1
Enh358MCK
cTNT
GFAP
MBP
风场
英特百奇
αMHC
hRPE
mIP1
tMCK |
|
Promoterless
巨细胞病毒
CAG
H1
U6
Synapsin
哥伦比亚大学
EF1α
铝青铜(1.4)
载脂蛋白e / AAT1
CaMKII
ELA1
Enh358MCK
cTNT
GFAP
MBP
风场
英特百奇
αMHC
hRPE
mIP1
tMCK |
巨细胞病毒
CAG
H1
U6
Synapsin
哥伦比亚大学
EF1α
CaMKII
cTNT
GFAP
|
eGFP
招标书
mRFP
mCherry
tdTOMATO
TurboGFP
eYFP
金星
卢克
LacZ
|
用于CRISPR/Cas9 rAAV生产 |
单启动子CRISPR/Cas9 AAV顺式载体
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双启动子CRISPR/Cas9 AAV顺式载体
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Promoterless
U6
H1
巨细胞病毒
CAG
CBH
Synapsin
哥伦比亚大学
EF1α
铝青铜(1.4)
载脂蛋白e / AAT1
CaMKII
ELA1
Enh358MCK
cTNT
GFAP
MBP
风场
英特百奇
αMHC
hRPE
mIP1
tMCK |
空
CBH
U6
H1
sCMV
Syn
sEF1α
CK 0.4
cTNT
GFAP 0.6
sSyn
风场
英特百奇
αMHC
hRPE
mIP1
tMCK
CBH |
Cas9
hCas9
SpCas9
hSpCas9
SaCas9
AsCpf1
hAsCpf1
ftCas9
st1Cas9
cjCas9
cdCas9
ciCas9
ncCas9
st3Cas9
nmCas9
mgCas9
nsCas9
|
Promoterless
sCMV
U6
H1
tRNA
Syn
sSyn
sEF1α
CaMKII 0.4 |
巨细胞病毒
sCMV
CBH
H1
U6
Syn
sSyn
sEF1α
CaMKII 0.4
|
Cas9
hCas9
SpCas9
hSpCas9
SaCas9
AsCpf1
hAsCpf1
ftCas9
st1Cas9
cjCas9
cdCas9
ciCas9
ncCas9
st3Cas9
nmCas9
mgCas9
nsCas9
|
服务描述:
1.合成并克隆shRNA到AAV中独联体向量。
2.媒介将AAV·HT™293细胞大规模转染至1xcell stack。
3.收获rAAV粒子之后采用先进的2xCsCl超离心纯化，获得临床试验级rAAV载体。
4.通过qPCR进行rAAV滴定。
我们提供的rAAV血清型:
Aav-1, aav-2, aav-3, aav-4, aav-5, aav-6, aav-7, aav-8, aav-9, aav-php。B, AAV-PHP。eB、AAV-DJ/8和AAV-DJ．
所需材料:NCBI登录#，目标序列，验证siRNA或验证shRNA序列;miRNA accession #， pre-miRNA，成熟miRNA或TuD (tough decoy) miRNA。
周转时间:3.～4周。
可交付成果:>0.2 mL超级纯化体内等级rAAV载体>1E+13 VG/mL*．
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图1所示。对不同来源的rAAV载体的纯度和传染性进行了比较，结果显示，通过我们先进的双CsCl超离心方法制备的rAAV载体具有超纯度和超传染性(接近临床试验级别)。
A. SDS-PAGE分离不同来源的rAAV载体(共1E+9 VG / lane)，然后银染色。Lane 1: GMP生产的CHOP rAAV载体;2车道:采用先进的2xCsCl超离心方法制备的rAAV;Lane 3:来自BCM Vector Core的rAAV;第四道:我们的竞争对手“V”的rAAV;5道:我们的竞争对手C的rAAV;第六道:蛋白质标记。
B.通过先进方法制备的超级传染性rAAV载体双中海ultra-centrifugation．左面板:我们的竞争对手“V”注入小鼠眼的rAAV9-GFP(共5E+9 VG);右图:经高级2xCsCl纯化的rAAV-9-GFP(共5E+9 VG)ultra-centrifugation注射到老鼠的眼睛。
图2。对不同来源的rAAV载体的传染性进行了比较，结果表明采用先进的双CsCl超离心方法制备的超纯化rAAV具有超强传染性。
将不同来源的rAAV1-GFP(总2E+9 VG)注射到小鼠肌肉组织。注射后3周观察GFP荧光。A.竞争对手“V”的rAAV1-GFP;B. rAAV1-GFP，来自我们预先制作的rAAVs库存，通过高级纯化中海ultra-centrifugation两倍。C。定量数据表明，我们的超纯化rAAV (bar 2)比常规CsCl超离心制备的(bar 1)传染性高约9倍。
*最终的病毒产量可能取决于转基因的性质。
