shRNA/miRNA/gRNA rAAV生产大规模全面服务
特点:
-在大多数细胞类型，包括分裂和非分裂或原代细胞中具有良好的基因传递效率。
——多个血清型(AAV-1、AAV-2、AAV-3、AAV-4、AAV-5、AAV-6、AAV-8、AAV-9、AAV-DJ/8、AAV-DJ)．
-持久的转基因表达。
-诱导有效的基因沉默。
大型shRNA/miRNA/gRNA AAV顺式载体库，用于构建具有特定启动子和报告基因的AAV顺式质粒:
用于传统的shRNA/miRNA/TuD rAAV生产 |
单启动子shRNA/miRNA AAV顺式载体
 |
双启动子shRNA/miRNA rAAV顺式载体
 |
Promoterless
巨细胞病毒
CAG
H1
U6
Synapsin
哥伦比亚大学
EF1α
铝青铜(1.4)
载脂蛋白e / AAT1
CaMKII
ELA1
Enh358MCK
cTNT
GFAP
MBP
风场
英特百奇
αMHC
hRPE
mIP1
tMCK |
|
Promoterless
巨细胞病毒
CAG
H1
U6
Synapsin
哥伦比亚大学
EF1α
铝青铜(1.4)
载脂蛋白e / AAT1
CaMKII
ELA1
Enh358MCK
cTNT
GFAP
MBP
风场
英特百奇
αMHC
hRPE
mIP1
tMCK |
巨细胞病毒
CAG
H1
U6
Synapsin
哥伦比亚大学
EF1α
CaMKII
cTNT
GFAP
|
eGFP
招标书
mRFP
mCherry
tdTOMATO
TurboGFP
eYFP
金星
卢克
LacZ
|
用于CRISPR/Cas9 rAAV生产 |
单启动子CRISPR/Cas9 AAV cis载体
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双启动子CRISPR/Cas9 AAV cis载体
 |
Promoterless
U6
H1
巨细胞病毒
CAG
CBH
Synapsin
哥伦比亚大学
EF1α
铝青铜(1.4)
载脂蛋白e / AAT1
CaMKII
ELA1
Enh358MCK
cTNT
GFAP
MBP
风场
英特百奇
αMHC
hRPE
mIP1
tMCK |
空
CBH
U6
H1
sCMV
Syn
sEF1α
CK 0.4
cTNT
GFAP 0.6
sSyn
风场
英特百奇
αMHC
hRPE
mIP1
tMCK
CBH |
Cas9
hCas9
SpCas9
hSpCas9
SaCas9
AsCpf1
hAsCpf1
ftCas9
st1Cas9
cjCas9
cdCas9
ciCas9
ncCas9
st3Cas9
nmCas9
mgCas9
nsCas9
|
Promoterless
sCMV
U6
H1
tRNA
Syn
sSyn
sEF1α
CaMKII 0.4 |
巨细胞病毒
sCMV
CBH
H1
U6
Syn
sSyn
sEF1α
CaMKII 0.4
|
Cas9
hCas9
SpCas9
hSpCas9
SaCas9
AsCpf1
hAsCpf1
ftCas9
st1Cas9
cjCas9
cdCas9
ciCas9
ncCas9
st3Cas9
nmCas9
mgCas9
nsCas9
|
服务描述:
1.设计、合成并克隆shRNA/miRNA成AAV独联体向量。
2.大规模转染AAV·HT™293细胞成2xcell堆栈。
3.采集rAAV，采用先进的2xCsCl超离心纯化，获得临床试验级别的rAAV载体*。
4.脱盐、过滤杀菌、qPCR AAV滴定。
我们提供rAAV血清型:
Aav-1, aav-2, aav-3, aav-4, aav-5, aav-6, aav-7, aav-8, aav-9, aav-php。B, AAV-PHP。eB、AAV-DJ/8和AAV-DJ．
所需材料:NCBI accession #， shRNA target sequence, validated siRNA或validated shRNA sequence;miRNA accession #， pre-miRNA或成熟miRNA或TuD (tough decoy) miRNA。
周转时间:3.～4周。
可交付成果:> 1.0毫升超级体内级rAAV载体>1E+13 VG/mL*。
我们为新客户提供折扣请求报价今天与我们在一起。
我们还提供截短定制shRNA AAV服务，请请求报价今天与我们在一起。
图1所示。不同来源的rAAV载体纯度和传染性的比较表明，采用我们先进的双csl超离心方法制备的rAAV载体具有超纯度和超传染性(接近临床试验级)。
不同来源的A. rAAV载体(每lane 1E+9 VG)经SDS-PAGE分离，银染色。Lane 1: CHOP GMP制造rAAV载体;Lane 2:采用我们先进的2xCsCl超离心法制备rAAV;泳道3:来自BCM矢量核的rAAV;第四道:竞争对手V的rAAV;第五道:竞争对手“C”的rAAV;第六道:蛋白质标记。
B.通过advanced制备的超级传染性rAAV载体双中海ultra-centrifugation．左图:竞争对手“V”公司rAAV9-GFP(共5E+ 9vg)小鼠眼注射;右图:通过高级2xCsCl纯化的rAAV-9-GFP(总5E+ 9vg)ultra-centrifugation注射到老鼠的眼睛。
图2。不同来源rAAV载体的传染性比较表明，采用先进的双CsCl超离心法制备的超纯化rAAV具有超传染性。
将不同来源的rAAV1-GFP(总2E+ 9vg)注射到小鼠肌肉组织。注射3周后可见GFP荧光。A.竞争对手“V”的rAAV1-GFP;B. rAAV1-GFP来自我们预先制作的rAAVs库存，通过先进的净化中海ultra-centrifugation两倍。C。定量数据表明，我们的超纯化rAAV (bar 2)的传染性是常规CsCl超离心制备的(bar 1)的9倍。
*最终病毒产量可能取决于转基因的性质。
