蛋白质印迹是一种分析方法,在使用单克隆或多克隆抗体检测前,将蛋白质固定在膜上。有不同的印迹协议(点印迹,2D印迹);最有效的方法之一是western blotting。
蛋白质印迹法或免疫印迹法允许研究人员通过一种特定的一抗来确定不同样本中蛋白质的相对含量。简单地说,1)样品是从组织或细胞中制备的,在缓冲液中均质化,以保护感兴趣的蛋白质免于降解;2)用SDS-PAGE分离样品,转移至膜上检测;3)将膜与普通蛋白(如乳蛋白)一起孵育,以结合膜上任何剩余的粘性部位。然后将一抗添加到能够与其特定蛋白质结合的溶液中;4)加入二抗-酶结合物,识别一抗,以找到一抗结合的位置。
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