蛋白质印迹是一种分析方法,涉及使用单克隆或多克隆抗体检测前在膜上固定蛋白质的方法。有不同的印迹协议(DOT印迹,2D印迹);最强大的是蛋白质印迹。
蛋白质印迹或免疫印迹允许研究人员用特定的原代抗体确定不同样品中存在的蛋白质的相对量。简而言之,1)样品是由在保护感兴趣的蛋白质免于降解的缓冲液中均质的组织或细胞制备的;2)使用SDS-PAGE分离样品,然后转移到膜进行检测;3)将膜与通用蛋白(例如牛奶蛋白)一起孵育,以结合膜上的任何持续粘性位置。然后将原代抗体添加到能够与其特异性蛋白结合的溶液中。4)辅助抗体 - 酶结合物,该结合物识别添加原代抗体以找到一抗结合的位置。
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