188金宝慱亚洲体育APP下载188金宝搏下载手机版SignaGen Laboratories (SignaGen)是一家专注于为生物医学研究社区开发和制造基因传递工具的小型企业。SignaGen基于我们独特的技术平台(专利申请中，美国PTO # 61135606 & 072308)，成功开发了三类DNA/RNA转染试剂，并以极高的效率和低细胞毒性轻松188金宝慱亚洲体育APP下载击败领先产品。更重要的是，我们以合理的价格提供这些转染试剂。
1.生物可降解聚合物（BDP）合成：
该BDP技术是我们正在申请专利（美国PTO#61135606&072308）的专有技术，允许我们合成可生物降解的聚阳离子聚合物。与其他可用的阳离子聚合物（如聚赖氨酸和聚乙撑胺）以及阳离子脂质体不同，这种新型聚合物具有独特的骨架，在基因载体卸载哺乳动物细胞内的DNA/RNA后可以降解（图1），从而导致极低的细胞毒性。此外，这种新型聚合物被证实具有良好的核酸结合亲和力和高缓冲能力，符合良好基因载体的基本设计标准。体外DNA转染实验表明，这种新型生物可降解聚合物在向HEK293T细胞输送DNA方面的效率是聚（乙撑亚胺）的2至10倍。
图1。一幅用可生物降解聚合物进行DNA转染的漫画
2.病毒蛋白模拟(vip)技术:
基因治疗是通过基因治疗药物的传递和表达来治疗人类遗传性和后天性疾病的先进技术。使用安全、高效、可控的基因载体是临床基因治疗成功的先决条件之一。虽然病毒载体在基因传递方面非常有效，但它们潜在的安全性和免疫原性问题增加了它们在临床应用中的风险。作为病毒载体的替代品，我们开发了一种独特的VIPs技术来模拟病毒核靶向肽序列。基于该VIPs平台，创建、合成和筛选了一系列模拟病毒（如慢病毒）核靶向肽序列。经证实，与脂质体DNA转染试剂相结合，这些模拟肽系列能够穿透细胞核孔，从而将DNA/RNA直接传递到细胞核（图2）。初步结果表明，几种模拟肽可以显著（高达100倍）提高脂质体对多种哺乳动物细胞的基因传递效率。有趣的是，在难以转染的非分裂细胞上观察到了协同效应，为难以转染的细胞提供了一种潜在的非病毒核酸载体。
图2。显示VIP模拟肽与脂质体转染试剂协同效应的动画
3.细胞转染技术:
细胞膜结构是脂质双层结构。脂类是两亲性的，因为它们有亲水性的极性头指向外面，疏水性部分形成核心。然而，细胞膜表面不均匀（图3-I）。许多外周膜分子包括糖脂、糖蛋白、糖脂中的碳水化合物和跨膜蛋白、离子通道也是膜的组成部分。此外，大多数细胞被其他几种类型的蛋白质修饰，这些蛋白质可以与其他细胞或细胞外基质结合。它们被称为细胞粘附分子（CAM）。所有这些外周膜分子被称为细胞的毛发（图3-I），阻碍转染复合物（图3-II和III）进入和穿透细胞，影响转染复合物的内吞作用。这就是为什么常规转染程序通常会导致较低的转染效率，尤其是在难以转染的细胞上。为了绕过细胞毛发的屏障，防止转染复合物的内吞作用，我们开发了具有专有转染协议的独特转染试剂。通过我们的专有转染程序“刮毛细胞转染（SCT）”，在进行转染之前，细胞的毛发会被暂时刮毛，然后再重新电镀刮毛细胞（图3-IV&V）。SCT技术使转染复合物更容易、更有效地穿过和穿透细胞膜，从而使效率比未切割细胞高3~15倍（图3-V&VI）。SCT技术对于转染难以转染的细胞非常有用。
图3。一幅展示刮毛细胞转染技术工作原理的漫画
4.转染介导的细胞毒性去除技术:
在DNA/siRNA转染操作中，研究人员经常遇到以下难题:高效的转染试剂往往具有很强的细胞毒性。有时毒性太强以至于转染后大量细胞被杀死。因此，研究人员不得不牺牲转染效率来换取相对健康的细胞。现在我们提供了一种解决方案，通过去除转染介导的细胞毒性(否则会杀死细胞)来实现最大的转染效率，同时保持相对良好的细胞活力。经过多年的研究，我们发现是转染复合物粘附在边缘导致了细胞毒性(图4，上图)。由于转染复合物的性质，不可能在转染后仅用中换液就将复合物洗掉。我们开发一个独特的产品,一些化学物质混合,使鸡尾酒(专利申请中,美国专利和商标局# 62375686)这是证实有效清除所有绑定到细胞的转染复杂边与5分钟孵化在室温下(图4中,较低的面板),从而消除转染介导细胞毒性。
图4。一幅展示转染介导的细胞毒性去除（TMCR）技术如何工作的漫画
5.基于pH值的构象变化(PDCC)技术用于siRNA高效传递:
虽然脂质体或聚合物试剂通常具有很好的DNA递送效果，但它们无法有效地将siRNA导入哺乳动物细胞。脂质体或基于聚合物的siRNA转染试剂的不良性能可能与siRNA阴离子段的长度有关，该段太短，无法与阳离子脂质或多阳离子聚合物保持静电粘合。因此，siRNA脂质复合体或多聚体在接触多阴离子细胞表面时很容易断裂。我们用特定的疏水基团修饰脂质体和聚合物，使其在生理pH条件下产生pH依赖性构象变化（PDCC），并大大稳定siRNA lipolplex或polyplex。PDCC技术产生的同样重要的特性是，通过添加特定的疏水基团，siRNA lipoplex或polyplex纳米颗粒可以控制为病毒样大小，从而获得更好的siRNA转染效率。
图5。一幅展示如何pH依赖性构象变化(PDCC)技术作品
6.Ad.MAX™ 最大限度生产腺病毒的技术：
广告。MAX™ technology was developed by genetically modifying virus packaging cell, HEK293 cell and adenoviral shuttle vector or adenoviral genome for maximum adenovirus production. The core of this proprietary technology lies in the genetically engineered HEK293 in which adenoviral replication is kept intact while viral protein expression during adenovirus packaging process is significantly suppressed. In combination with a trans-element in adenovirus genome which recognizes the suppressor cassette of HEK293 cell, Ad.MAX™ system allows maximum adenovirus production with minimum protein expression during viral packaging. This system is extremely useful for packaging adenoviral vectors with toxic genes of interests (GOI), which will otherwise kill HEK293 during adenovirus replication and production (Figure 6), leading to dramatic reduction in adenovirus yield. Ad.MAX™ technology eventually allows researchers to construct all genes (<7.5 kb) to adenovirus.
图6。如何做广告的卡通。马克斯™技术作品
7.以超高滴度生产超级传染性rAAV颗粒的多种方法：
与腺病毒不同，常规rAAV生产程序相对较难获得高产量的rAAV。通过采用以下多种策略，我们成功地以超高滴度（高达1E+15 GC）生产出超传染性（比传统rAAV的传染性高约30倍）rAAV颗粒。
- AAV·HT™包装电池:我们筛选了不同类型的HEK293细胞，并开发了一株高产菌株——AAV·HT™ 根据我们的验证数据，包装单元产生的rAAV颗粒约为常规HEK293的10倍。
-修改rAAV顺式矢量:客户可以选择带有转基因下游截断的WPRE盒的rAAV顺式载体。在rAAV-cis载体中加入WPRE盒可以产生比不含WPRE的rAAV-cis载体多约8倍的rAAV颗粒。
-修改rAAV衣壳:rAAV衣壳在几个特定位点的突变显著（~30倍）体外&体内)提高rAAV转导效率。客户可以选择使用突变衣壳包装rAAV，以产生更具传染性的rAAV载体。
–成套双绞线AAV（dsAAV）：双链AAV（dsAAV）也被称为自互补AAV（scAAV），被证实在这两种病毒中的转导效率高达50倍体外培养和活泼地．定制服务可用来生成和包装感兴趣的基因到一个scav载体*。
–高级双CsCl超离心协议：高级方案的主要特点是在冷冻/解冻循环和预沉淀步骤后，在装载至超速离心之前，使用特殊配方的清洁剂进行处理。高级方案以高产量生产超纯化（临床试验级）和超传染性rAAV载体。看见图8详情请参阅。与传统协议的不同之处用红色框起来。
图7。以超高滴度生产超传染性rAAV颗粒的多种方法
图8。高级协议和常规协议的概述和比较。高级协议中的差异用红色框起来。