反应设置:为了获得最好的结果，我们建议每个RNA标准品和样本进行三次复制。

组件	20µL反应	最终浓度
Luna通用探针一步反应混合物(2X)	10µL	1 x
卢娜WarmStart®RT酶混(20X)	1µL	1 x
正向引物(10µM)	0.8µL	0.4µM
反引物(10 μ M)	0.8µL	0.4µM
探针(10µM)	0.4µL	0.2µM
RNA模板	变量	< 1µg(总RNA)
Nuclease-free水	20µL

1. 在室温下解冻Luna万能探针一步反应混合物和其他反应组分，然后放在冰上。完全解冻后，通过反转、移液或轻柔旋涡的方式将各组分短暂混合。
2. 确定适当数量的反应的总体积，加上10%的overage，并相应地准备除RNA模板外的所有组分的分析混合物。充分搅拌，但要轻轻移液或旋转。通过简单离心收集液体到管底。
3. 将分析混合物分装到qPCR管或平板中。为了获得最好的结果，确保准确和一致的移液量，并尽量减少气泡。
4. 将RNA模板加入qPCR管或平板中。用平的、透明的盖封管;用光学透明薄膜封板。应注意妥善密封板的边缘和角落，以防止工件的蒸发。
5. 快速旋转管子或盘子以去除气泡和收集液体(每分钟2,500-3,000转)。
6. 程序实时仪器与指示的热循环协议(见下表)。确保在扩展步骤的末尾包含一个读盘。