应用程序:
条带westernblot用于再探测和质谱分析
特点:
-在5~15分钟内去除污渍
-室温孵育
-不添加2-巯基乙醇或类似物,没有恶臭气味
-适当的配方,包含环保和无害的有机溶剂(有轻微的气味),以完全电离结合抗体
一、Western Blot条带检测
BlotFresh与Pierce’s Restore—Blot Stripping Buffer的比较
-印迹剥离和重新pro用同样的抗体*:
NIH 3T3细胞中不同处理的总Akt(目录# A0501-1)
*用ECL Plus开发2分钟�用柯达底片曝光20秒
- BlotFre上海圣�撕扯试剂比Pierce's Restore - Stripping Buffer更有效地分解抗原-抗体复合物:
BlotFresh�剥离试剂*皮尔斯的恢复� 膜再生液*
起初的Expose x 1 'Expose x 5 '起初的Expose x 1 'Expose x 5 '
*在接触β-actin抗体10秒后,对印迹进行初步检测。然后用BlotFresh -剥离试剂和Pierce's Restore -剥离缓冲液分别剥离5分钟和15分钟。洗涤后,用ECL Plus -欧显影2分钟,然后用柯达BioMax胶片分别曝光1分钟和5分钟,以测试剥离效果
——BlotFresh�溶出试剂条a免疫印迹,然后用不同抗体重新检测:
一个。用抗总Akt的抗体(目录#A0501-1)*检测印迹。
B.用BlotFresh�Stripping Reagent剥离印迹,再用phospho-Akt(目录# A0503-1)*进行再检测。
*Lane 1是血清饥饿过夜,而Lane 2~5在NIH3T3细胞中用不同浓度的PDGF处理。用ECL Plus印迹2分钟�试剂并在柯达底片(ECL Plus)上曝光10秒�是GE Healthcare-Amersham的商标)
应用二世。条带Western Blot质谱分析
Western Blot质谱分析方法:
-在RT下进行15分钟的条带印迹,去除一抗和二抗
-通过比较剥离的印迹和曝光膜找到蛋白质,并从印迹上剪下条带
-消化切割带,然后进行质谱分析(见下图)
数据表
感言:
…已收到新鲜的污渍样本� westernblot剥离试剂。很棒的产品!!已经用于去除相同的斑点2x,并且由此产生的三张射线照片与第二两种抗体的主要斑点难以区分。我今天要点一些。。。
------作者:美国国立卫生研究院NCI凯瑟琳·贝尔博士
没有它我活不下去!这太不可思议了。我曾经使用皮尔斯和我经常需要重新运行西部由于肮脏的印迹后strip。�自从我开始使用这个产品,我的生活发生了改变,它让我的研究更容易,我不再需要重新运行凝胶了,而且剥离过程只需要2分钟。这真是个了不起的产品!
------,作者是乔治华盛顿大学的詹妮弗·林博士
一些产品引用:
1.Mahmoud M. El-Mas, Ming Fan和Abdel A. Abdel- rahman。内毒素介导的心脏诱导型一氧化氮合酶表达与乙醇对雌性大鼠的降压作用有关。药理学实验研究。2008;324: 368 - 375
2.Grzegorz Woszczek, Li-Yuan Chen, Sahrudaya Nagineni, Sara Alsaaty, Anya Harry, Carolea Logun, Rafal Pawliczak, James H. Shelhamer。ifn - γ诱导半胱氨酸白三烯受体2的表达并增强人内皮细胞对半胱氨酸白三烯的反应性。免疫学杂志, 2007;178: 5262 - 5270
3.David A Baker、Aric Madayag、Lars V Kristianse、James H Meador Woodruf、Vahram Haroutunia和Ilangovan Raju.半胱氨酸-谷氨酸反转运体对苯西啶拟精神效应的贡献。神经精神药理学, 2007;8月29日在线出版
4.阿什利·威廉姆斯和帕特里夏·福斯特。大肠杆菌组蛋白样蛋白HU在稳态相适应突变中的作用。遗传学。2007;735年177:723�