制备超高滴度腺病毒质粒的转染方案

1.细胞准备:
5E+4孔Ad - MAX - 293细胞(或其他HEK293细胞)，24孔0.5 ml DMEM培养基，含10%胎牛血清。确保细胞均匀分布。将培养皿放置在空气中5% CO2的培养箱中，让细胞生长到90%以上的融合(24至48小时)。转染前用新鲜培养基喂养细胞。

2.转染程序:
A. DNA稀释:稀释线性化腺病毒DNA 1ug在50 ul基础DMEM培养基中(不含血清和抗生素)。轻轻混合。
B. GenJet +稀释:稀释3ul GenJet + (Cat。不。SL100499)， 50 ul基础DMEM培养基(不含血清和抗生素)。轻轻混合。
C.将“B”放入“A”中拌匀，室温静置10 - 20分钟。
将从“C”处取出的混合物小心地放入组织培养皿中。

3.细胞收获:转染后10天左右收获细胞，转染后第5天用新鲜培养基饲喂细胞，总PFU从5E+9到2E+10。

4.对于6孔板，每孔板式2E+5细胞。稀释3 ug线性化腺DNA在0.125 ml基础DMEM培养基(无血清和抗生素)。轻轻混合。稀释9.0 ul GenJet plus (Cat。No.L100499)加入0.125 ml基础DMEM培养基(不含血清和抗生素)中，轻轻混合。按照上述转染程序进行。