转染L929细胞的步骤

L929是一种小鼠非整倍体纤维肉瘤细胞系，常用于测定tnf - α和tnf - β。TNF治疗引起细胞凋亡和随后的细胞死亡，因此L929细胞常用于免疫检测。然而，L929细胞不易转染，尤其是对脂质体转染方法有抗性。我们一直在使用GenJet Ver。转染L929细胞，转染效率高达75%。下面介绍用GenJet和PolyJet转染L929细胞的简单步骤。
1.在转染当天将L929细胞培养到80%左右。L929细胞必须是健康的，少于9传代，以获得最大的效率。
2.对于6孔板，稀释1.0�g的DNA和3.0�l的GenJet Ver。II或PolyJet试剂每孔分别与无血清DMEM。将稀释的试剂加入稀释的DNA中，在RT条件下15分钟形成转染复合物。对于其他形式的细胞培养形式，按培养皿表面面积的大小按比例缩小或扩大。
3.将转染复合物直接加入L929细胞中。在有血清/抗生素的情况下进行转染，6孔板每孔转染量为1.0 ml。
4.转染后24~48小时检查转基因表达情况。