siRNA沉默试剂的优化。

——siRNA转染试剂(Cat # SL100568)是市场上最有效的siRNA传递工具之一。最佳siRNA浓度范围为1.0 nM ~ 10 nM。过多的siRNA可能会导致“泛洪效应”，导致失谐。我们的实验室已经很幸运地使用GenMute试剂来敲除内生表达的生长因子。以下步骤将指导优化GenMute试剂在24孔板最佳沉默。对于其他细胞培养格式，请参考GenMute试剂的方案。

1).转染前30或60分钟，更换培养基，每孔加入全培养基0.5 ml(含血清和抗生素)。
2)将20 pmol siRNA (5.0 - M x 4.0 - l)稀释到200 - l GenMute转染缓冲液(Cat # SL100572)中，放入无菌管中，静置RT 5分钟。
3).加入2.0 - l GenMute试剂，短暂旋涡并保持转染复合物在RT下15分钟。请注意:在RT中，转染复合体的时间不要超过25分钟。
添加50�1转染复合物到你的细胞直接复制(最终10 nM siRNA)， 25�1复合物到另2孔(最终5.0 nM siRNA)， 12.5�1到第三2孔(最终2.5 nM siRNA)和6.25�1到第4 2孔(最终1.25 nM siRNA)。
5).检测转染后24~48小时4种不同siRNA浓度的沉默效果，选择最佳转染条件。