描述
DNA GenJet�在体外对HepG2细胞转染试剂进行了预优化细胞转染。HepG2 (human Hepatocellular carcinoma, human)是一种永久性添加细胞系，来自于一名15岁白人男性肝组织中分化良好的肝癌。这些细胞在形态上是上皮细胞，模型染色体数目为55，在裸鼠中不产生肿瘤。细胞分泌多种主要的血浆蛋白，例如:白蛋白，α 2-巨球蛋白，α 1-抗胰蛋白酶，转铁蛋白和纤溶酶原。它们已经在大规模的种植系统中成功地生长。乙型肝炎病毒表面抗原尚未检测到。HepG2细胞已被证明具有G418耐药(400�g/mL)。细胞会对人体生长激素的刺激做出反应。
以下为HepG2细胞转染效率最高的最佳转染条件。GenJet试剂，1.0 ml, 24孔板300 ~ 600转染，6孔板150 ~ 300转染。
最佳转染条件总结:
HepG2细胞培养
在转染当天进行融合
细胞培养条件
GenJet: DNA(�g)比例
DNA稀释剂和转染试剂
形成GenJet复合物的孵化时间
转染过程中血清/抗生素的存在
转染5小时后更换培养基
最大效率
转染结果:
报告基因
质粒
效率(GFP %) |
I型胶原预处理培养皿
~ 90%
DMEM加4.5 g/L葡萄糖，10%胎牛血清
3：1
无血清DMEM，含4.5 g/L葡萄糖
15分钟RT
是的
没有
48小时
EGFP
pEGFP-N3 (CMV启动子)
82％
|
储存条件
4欧元。如果储存得当，产品可以稳定12个月或更长时间
图显示GenJet试剂转染HepG2细胞的效率
GenJet试剂优化HepG2细胞(ATCc# HB-8065)，与Lipofectamine 2000 (L2K)和Amaxa电穿孔装置相比，具有卓越的效率。HepG2细胞在ATCC推荐的培养皿中培养，在I型胶原处理培养皿中转染pEGFP-N3。转染后48小时检测效率。
右面板:GenJet与Lipofecatmine 2000 (L2K)转染效率比较和开启Amaxa电穿孔装置HepG2细胞。将GFP DNA (pEGFP-N3, 4.7 kb)引入HepG2细胞(在胶原预处理培养皿中培养)，根据制造商的协议使用不同的转染试剂。转染48 h后，通过流式细胞仪检测GFP阳性细胞(%)和荧光强度
左面板:血清和抗生素的存在提高了GenJet试剂对HepG2细胞的效率。HepG2细胞(生长在胶原蛋白处理的培养皿上)在以下三种条件下转染:-------血清和无抗生素，转染后5小时去除10%血清和抗生素，转染后5小时不去除10%血清和抗生素。
GenJet试剂优化HepG2细胞(ATCc# hb - 8065)。消息灵通的在经I型胶原处理的培养皿中，按照ATCC推荐的培养基培养G2细胞，并转染GFP (pEGFP-N3, 4.7 kb，右图)和β牛乳糖cDNA(埃因霍温-β-半乳糖苷酶，6.9 kb，左图)，使用预先优化的GenJet - DNA转染试剂转染HepG2细胞。转染48小时后用蔡司510共聚焦显微镜检测转染效率β-半乳糖苷酶染色试剂盒。
数据表
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证明年代
经试验，取得了比Amaxa核因子更好的效果。我和一个同事，会在所有的转染实验中用到它。
---------- Fouad弗朗西斯。博士,美国儿童健康与人类发展研究所/国家卫生研究院
我用GFP质粒的效率是70%我感兴趣的蛋白质是200KDa，我得到了20%的效率，和Amaxa电穿孔相当。谢谢你SignaGe188金宝慱亚洲体育APP下载n。
--------玛丽娜·乌哈特博士，NHLBI/NIH
哇! !什么产品。我们一直在HepG2上使用Lipofectamine 2000，并一直在努力获得哪怕是适度的转染效率。相比之下，GenJet为我们提供了更高的转染效率。从外观上看，提高了5-10倍。尤其令人印象深刻的是，用更少的试剂和更少的DNA就能得到更好的结果。我们未来的HepG2实验将全部由GenJet完成。谢谢。
--------埃里克·斯纳普，博士，爱因斯坦医学院。
