制备超高滴度AAV的质粒转染方案

1.细胞准备:
将5E+6 AAV - HT -包装细胞(或其他HEK293细胞)置于150mm组织培养皿中，培养液为15 ml DMEM，培养液中含有10%胎牛血清。确保细胞均匀分布。将培养皿放置在空气中5% CO2的培养箱中，让细胞生长到90%以上的融合度(24 - 48小时)。在转染前给细胞注入新鲜培养基。

2.转染(每150mm板):
A. DNA稀释:用于转染的质粒数量为Capsid 10ug, pHelper 16ug, cis-plasmid 10ug，用0.5 ml基本DMEM培养基(不含血清和抗生素)稀释后，温和混合。
B. GenJet Plus (Cat # SL100499)稀释:将90 ul GenJet Plus试剂稀释到0.5 ml基础DMEM培养基中(不含血清和抗生素)，然后温和混合。
c、将“B”放入“A”中拌匀，室温静置约10分钟。
将混合物从“C”倒入一个150毫米的盘子中。

3.细胞收获:
转染后48 - 36小时收集细胞。产量约1E+13 VG总从10x150毫米板。