经常被忽略的优化Piled293试剂的点

Lipod293 DNA转染试剂是一种增强的脂质体DNA递送工具。Lipod293 DNA转染试剂已被用于转染Hepg2，LNCAP，CHO和HEK293细胞，并证明在所有情况下都有成功。
这些是我们认为在使用Lipod293试剂的同时实现最大效率和最小毒性的重要性，我们认为这是一个重要的技术要点：

1. Lipod293试剂与DNA的比例：虽然最佳比率是细胞型依赖性，但是试剂与3：1的DNA的比率通常会产生优异的效率。我们的实验室一直在高效率的3：1比率将Hepg2，LNCAP，CHO和HEK293转染上Hipod293试剂。

2.每孔DNA量：对于24孔板，我们每孔使用0.2至0.5μg的DNA。不需要过多的DNA（例如，每孔1.0μg），可能导致高细胞毒性。对于其他细胞培养形式，根据培养皿的表面积调节DNA量。

3.稀释DNA和Lipod293试剂的稀释剂：稀释剂必须是无血清。具有高葡萄糖的普通DMEM培养基通常是功能性的，尽管高葡萄糖未被证明是必要的。建议不要使用Opti-Mem（来自Invitrogen）。如果未使用合适的稀释剂并滥用Opti-Mem，它可能导致次优效率。根据我们的初始测试，OPTI-MEM可能会破坏转染复合物的形成。

4.用血清和抗生素转染：对于我们目前使用的所有哺乳动物细胞，我们始终在血清（10％FBS）/抗生素存在下对Lipod293试剂进行转染，而不会影响任何效率，从而大大简化了我们的转染程序。与其他基于脂质体的试剂不同，Lipod293试剂通常不受血清/抗生素干扰，因此不必在无血清培养基中进行转染，否则可能导致高细胞死亡。

5.中等变化后转染：我们通常在转染后24小时改变培养基。在我们目前使用的任何哺乳动物细胞似乎不需要转染后5小时的介质改变。