siRNA/DNA共转染试剂的优化。

——siRNA转染试剂(Cat # SL100568)是市场上最有效的siRNA传递工具之一。siRNA/DNA共转染的最佳siRNA浓度为0.5 ~ 10 nM。过多的siRNA可能会导致“泛洪效应”，其中可能包括沉默效应，所以不要使用大于20nm的siRNA。以下步骤将指导优化GenMute试剂以获得最佳的siRNA/DNA共转染24孔板。对于其他细胞培养格式，请参考GenMute试剂的方案。

1.转染前30或60分钟，更换培养基，每孔加入0.5 ml完全培养基(含血清和抗生素)。
2.稀释总额的0.5�克每个无菌管DNA 4管50�l GenMute转染缓冲区(猫# SL100572)其次是除了系列稀释siRNA每个总数的4管——添加5.0 pmol siRNA 1管,2.5 pmols第二管,1.25 pmols三管和1.25 pmols四管。我们在RT坐5分钟吧。
3.加入3.0�l GenMute�试剂稀释每根试管的siRNA/DNA，短暂涡旋，并保持转染复合物在RT 15分钟。请注意:在RT中，转染复合体的时间不要超过25分钟。
4.连续4孔24孔板，加入用相同浓度的DNA制备的转染复合物(0.5�g每孔)和4个不同浓度的siRNA范围从最终10 nM至1.25 nM。
5.检测转染后24~48小时的4孔沉默效果，选择最佳转染条件。