转染问题 |
可能原因 |
建议的解决方案 |
转染效率低。 |
未使用最佳转染试剂。 |
选择合适的转染试剂可能会为您的细胞类型带来最高的转染效率。点击我们网站上的“支持”标签，查看转染提示。或者，请联系我们的技术支持，网址为tech@188金宝慱亚洲体育APP下载www.gjp158.com |
转染效率低。 |
DNA转染试剂复合物形成不良或根本没有形成。 |
在复合物形成步骤中，切勿使用血清。建议使用无血清DMEM形成复合物。虽然我们建议使用含血清的培养基进行转染，但必须首先在没有血清的情况下形成转染复合物。
注意：切勿使用Opti MEM，因为它会破坏转染复合物。 |
转染效率低。 |
在转染复合物形成过程中存在抑制剂。 |
无血清DMEM对转染复合物的形成至关重要。在复合物形成步骤中避免使用以下化学品：高浓度磷酸盐、硫酸软骨素、透明质酸、硫酸葡聚糖或其他硫酸化蛋白多糖。 |
转染效率低。 |
冷冻阳离子脂质。 |
请勿使用阳离子脂质试剂（LipoD293™, LipoJet™ 和PowerFect™, 等）已经冻结。储存温度为+4°C。 |
转染效率低。 |
次优细胞密度。 |
对于DNA转染或DNA/siRNA共转染，细胞在转染时应约70%汇合。对于siRNA转染，细胞密度应在转染时约50%汇合。 |
转染效率低。 |
未使用最佳转染试剂浓度、DNA浓度、培养时间或细胞密度。 |
根据转染试剂方案优化这些参数。点击我们网站上的“支持”标签，查看转染提示。如需进一步的技术建议，请发送电子邮件至tech@188金宝慱亚洲体育APP下载www.gjp158.com |
转染效率低。 |
转染试验的问题。 |
记得在转染试验中加入阳性对照。 |
转染效率低。 |
细胞类型不识别转染DNA的启动子增强子。 |
确保转染的DNA与目标细胞类型兼容。 |
转染效率低。 |
未使用正确的缓冲液稀释GenMute™, GenJet™, PowerFect™ 还有佩普·穆特™ siRNA试剂和siRNA。 |
对于GenMute™, GenJet™, PowerFect™ 还有佩普·穆特™ siRNA试剂，务必使用其预先优化的特定缓冲液稀释这些siRNA试剂和siRNA。 |
转染效率低。 |
在加入细胞培养皿之前，将转染复合物在室温下保持太长时间。 |
对于我们的大多数DNA/siRNA转染试剂，在室温下10~20分钟内形成最佳复合物。不得在室温下将综合体放置超过30分钟。 |
转染效率低。 |
细胞密度对于LipoD293来说太低™ 试剂转染。 |
以约70%的融合率使用细胞进行脂质293™ 试剂转染。 |
转染效率低。 |
制备转染复合物时转速过高。 |
方案建议通过漩涡将转染试剂与DNA或siRNA混合，然后进行短暂的百分之几次搅拌，将任何液滴拉至试管底部。超过100xg持续5秒可能导致转染复合物沉淀，效率非常低。 |
MDCK、MB2231、SaoS-2等难转染细胞转染效率低。 |
使用了不正确的转染方案。 |
为GenJet™, 脂蛋白293™ 和PolyJet™ 试剂，请尝试先进的协议，难以转染细胞，如MDCK，MDA_MB231，SaoS-2等，以提高效率。 |
高细胞死亡（毒性）。 |
太多的DNA。 |
执行剂量-反应曲线以确定最佳DNA量。在剂量反应转染中加入阳离子脂质试剂，因为DNA单独对细胞生长的影响最小。 |
高细胞死亡（毒性）。 |
转染试剂过多。 |
进行剂量-反应曲线以确定转染试剂的最佳用量。将DNA与转染试剂一起纳入剂量反应实验，因为单独使用转染试剂对细胞生长的影响最小。 |
高细胞死亡（毒性）。 |
细胞密度太低。 |
对于DNA转染，细胞密度应在转染时约70%汇合。对于siRNA转染或DNA/siRNA共转染，转染时细胞密度应为50%至70%。低细胞密度可能导致更严重的细胞死亡。 |
高细胞死亡（毒性）。 |
细胞活力下降或严重细胞死亡。 |
我们所有的转染试剂都不受血清和抗生素的干扰，因此在有血清（10%FBS）和抗生素的情况下进行转染。 |
高细胞死亡（毒性）。 |
为了稳定转染，选择抗生素添加得太早。 |
在添加选择性抗生素之前，让细胞至少48小时表达耐药性。 |
高cPepMute的细胞死亡（毒性）™, 基因沉默™ 或佩普穆特™ 加上siRNA试剂。 |
使用补充有血清（FBS 10%）和抗生素的DMEM细胞培养基。 |
使用补充有血清（FBS 10%）和抗生素的DMEM/F12或RPMI 1640基本培养基。佩普穆特™, 基因沉默™ 和佩普穆特™ 另外，发现siRNA试剂仅对DMEM基细胞培养基有毒。 |
转染不可重复。 |
转染时的融合情况有所不同。 |
保持转染参数如融合度和生长期的一致性。转染不可重复，细胞在培养基中发生变化。如果可能，解冻新鲜细胞或获得新的细胞系。 |
转染试剂溶液浑浊。 |
储存期间温度过低。 |
切勿冷冻转染试剂。GenJet应在+4°C温度下储存™ 系列试剂，只需在37°C下加热试剂几分钟，直到试剂澄清。这不会影响效率。 |
转染复合物沉淀。 |
存在过量的EDTA。 |
将DNA溶解在水中，而不是溶解在水中。 |
转染复合物沉淀。 |
复合物形成过程中过量的转染试剂和（或）DNA/siRNA。 |
确保复合物形成中转染试剂和DNA/siRNA的浓度不超过推荐量。 |
| siRNA转染过程中沉默效果差 |
未使用特定缓冲液稀释转染试剂和siRNA |
给Pepstute™, 基因沉默™, GenJet™ 和PowerFect™ siRNA转染试剂，我们建议使用其特定的转染缓冲液形成转染复合物，以实现最大程度的沉默。不使用缓冲器将导致消声效果不佳。 |
| siRNA转染过程中沉默效果差 |
未能使用最佳siRNA浓度 |
给Pepstute™, 基因沉默™, GenJet™ 和PowerFect™ siRNA转染试剂，我们建议使用最终1.0~100 nM siRNA进行最佳沉默。对于大多数粘附的哺乳动物细胞，从5.0nm的siRNA开始（通常会产生令人满意的沉默），而对于难以转染的细胞，从50nm的siRNA开始。 |
| DNA/siRNA共转染过程中沉默效果差 |
未使用特定缓冲液稀释siRNA转染试剂、DNA和siRNA。 |
给Pepstute™, 基因沉默™, GenJet™ 和PowerFect™ siRNA转染试剂，我们建议使用其特定的转染缓冲液形成转染复合物，以实现最大程度的沉默。 |
| DNA/siRNA共转染过程中沉默效果差 |
siRNA浓度过高或过低。 |
给Pepstute™, 基因沉默™, GenJet™ 和PowerFect™ siRNA转染试剂，我们建议使用1.0~20 nM的siRNA进行DNA/siRNA CO0转染。过高的siRNA浓度会产生泛洪效应，而过低的siRNA浓度不足以产生良好的沉默。 |
