描述
GenJet� 脱氧核糖核酸体外HepG2细胞的转染试剂针对HepG2进行了预优化细胞转染。HepG2(肝细胞癌,人类)是一种永久性add细胞系,来源于一名患有高分化肝细胞癌的15岁白人男性的肝组织。这些细胞在形态上为上皮细胞,模型染色体数目为55,在裸鼠体内不致瘤。细胞分泌多种主要血浆蛋白,例如白蛋白、α2-巨球蛋白、α1-抗胰蛋白酶、转铁蛋白和纤溶酶原。它们已在大规模栽培系统中成功生长。乙型肝炎病毒表面抗原尚未检测到。HepG2细胞已被证明具有G418抗性(400�g/mL)。这些细胞会对人类生长激素的刺激作出反应。
关于HepG2细胞的最大转染效率,请参考以下最佳转染条件。GenJet� 试剂1.0 ml足以在24孔板中进行300至600次转染,或在6孔板中进行150至300次转染。
最佳转染条件概述: HepG2细胞培养 在转染当天汇合 细胞培养条件 GenJet� (�l) :DNA(�g) 比例 DNA稀释剂和转染试剂 形成GenJet的孵化时间�/DNA复合物 转染期间血清/抗生素的存在 转染5小时后更换培养基 最大效率
转染结果: 报告基因 质体 效率(GFP%) |
I型胶原预处理培养皿 ~90% 含4.5 g/L葡萄糖的DMEM,10%FBS 3:1 含4.5 g/L葡萄糖的无血清DMEM RT时15分钟 对 不 48小时
表皮生长因子 pEGFP-N3(巨细胞病毒启动子) 82%
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储存条件
4号店�C.如果妥善储存,产品可稳定12个月或更长时间
显示GenJet转染效率的图片� HepG2细胞上的试剂
GenJet� 试剂针对HepG2细胞(ATC)进行了优化与Lipofectamine 2000(L2K)和Amaxa电穿孔装置相比,C#HB-8065具有优异的效率。HepG2细胞按照ATCC推荐的培养基在经I型胶原处理的培养皿上生长,并通过GenJet转染pEGFP-N3�. 转染48小时后检查效率。
右面板:GenJet与Lipofecatmine 2000(L2K)转染效率的比较,和Amaxa电子穿孔装置HepG2细胞。按照制造商的协议,使用不同的转染试剂将GFP DNA(pEGFP-N3,4.7kb)导入HepG2细胞(在胶原预处理培养皿上培养)。转染后48小时通过流式细胞仪检测GFP阳性细胞百分数和荧光强度
左面板:血清和抗生素的存在提高了GenJet试剂对HepG2细胞的效率。HepG2细胞(生长在胶原处理的培养皿上)在三种不同的条件下进行转染------无血清和抗生素,存在10%血清和抗生素,然后在转染后5小时去除,在转染后5小时不去除10%血清和抗生素。
GenJet� 试剂针对HepG2细胞(ATC)进行了优化C#HB-8065)。高效液相色谱G2细胞按照ATCC推荐的培养基在经I型胶原处理的培养皿上生长,并转染GFP(pEGFP-N3,4.7kb,右图)和β-半乳糖苷酶cDNA(pSV-β-半乳糖苷酶,6.9 kb,左面板),由预优化的GenJet提供� HepG2细胞DNA转染试剂。转染48小时后,通过蔡司510共焦显微镜和显微镜检查效率β-半乳糖苷酶染色试剂盒。
数据表
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证明信s
它已经过测试,并获得了比使用Amaxa核因子更好的结果。我和一位同事将在我们所有的转染实验中使用它。
----------福阿德·弗朗西斯博士,NIHD/NIH
我已经得到了70%的效率与绿色荧光蛋白质粒。我感兴趣的蛋白质是200KDa,我得到了20%的效率,与Amaxa电穿孔相当。谢谢你,先生。188金宝慱亚洲体育APP下载
--------Marina Uhart博士,NHLBI/NIH
哇!多好的产品啊。我们一直在HepG2上使用Lipofectamine 2000,并且一直在努力获得甚至适度的转染效率。相比之下,GenJet给了我们更高的转染效率。从外观上看,似乎有5-10倍的改善。特别令人印象深刻的是,我们使用更少的试剂和更少的DNA来获得更好的结果。我们未来的HepG2实验现在都将使用GenJet完成。谢谢
--------艾瑞克·斯纳普,阿尔伯特·爱因斯坦医学院博士。