siRNA转染试剂

描述:
PepMute�siRNA转染试剂是一种全新的siRNA传递工具，模拟病毒细胞穿透肽(CPPs)，可在多种哺乳动物细胞中提供超过95%的siRNA沉默效率．利用我们专有的肽模拟技术(PST)，我们模拟了数百种病毒CPPs，然后，PepMute�试剂被鉴定和验证为一种非常有效的压缩和转染短(100 bp以下)单链或双链核酸的载体年代这样的如siRNA, miRNA模仿和DNA寡聚物到哺乳动物细胞的广谱。


图1所示。一幅展示PepMute的漫画�siRNA转染试剂由PST开发

大小:
- PepMute�试剂，1.0 mL，在24孔板上转染0.5~5.0 pmol siRNA或miRNA模拟物，足以进行约1333次反应
- - - - - - Pep�Mute�转染缓冲(5x)，配制成最大转染效率，8.0 mL, 5倍浓缩原液，制成40 mL工作液

应用程序:
- siRNA miRNA模拟或mRNA转染
- DNA / siRNA co-transfection
- DNA寡聚物转染

储存:
PepMute的售价为4欧C�PepMute的试剂和RT．如果储存得当，产品可稳定保存12个月或更长时间。

优点:
-在最终的1.0 nM siRNA上极好的沉默
-各种细胞中95%以上的基因沉默
-一管反应，简单的标准方案
-血清和抗生素兼容
—适应HTS的协议
-非常低的细胞毒性
——非常负担得起的

PepMute�siRNA转染试剂与主导产品的沉默效果比较

图2。在HEK293细胞中，内源性表达的KIF11(也称为EG5)被极好地沉默，PepMu为1.0�l24孔板每孔试剂和0.5 pmol EG5 siRNA。KIF11(也称为EG5)进行编码一种运动蛋白，属于在细胞有丝分裂中参与染色体定位和双极纺锤体形成的激肽样蛋白家族。KIF11水平的降低导致有丝分裂停止。PepMute�试剂有效地将EG5 siRNA(最终1.0 nM)递送到HEK293细胞，导致转染后48h超过80%的HEK293细胞“聚集”表型，而阴性对照(最终1.0 nM，假EG5 siRNA)，而领先的siRNA转染试剂Lipofectamine�RNAiMAX (RNAiMAX，1.0 nM EG5 siRNA) /干扰素(1.0 nM EG5 siRNA) / Dharmafect (10.0 nM EG5 siRNA)和jetPRIME (20 nM EG5 siRNA)在HEK293细胞上分别产生平均37%、23%、53%和48%的球形表型。转染48h后，尼康显微镜观察“围捕”293细胞的表型(上图)并定量(下图)。


图3。上图显示的是PepMute�转染试剂与dharmaffect4(中间图)和Lipofectamin的沉默效果比较e�RNAiMAX (RNAiMAX，下图)A549细胞上的siRNA转染试剂。根据制造商的协议，用上述三种转染试剂将最终浓度在0.5 - 20 nM范围内的不同的靶向肾荧光素酶的siRNA与肾荧光素酶基因(每孔0.5 g pRL-CMV DNA)共转染到生长在24孔板上的A549细胞中。用肾荧光素酶测定系统(Promega)共转染36h后测定肾荧光素酶活性。发光的佤邦用照明仪(Beckman Coulter LD 400)集成10秒，从5.0欧的裂解液中测量。荧光素酶活性以超过10s整合的光单位(RLU)表示，每毫克归一化用BCA法检测细胞蛋白。误差条代表了三次实验得出的标准偏差。Lucifera相对于未经处理的细胞，计算硒沉默效率。而PepMute�和dharmaffect�4试剂从1.0 nM的肾荧光素酶siRNA中传递了显著的基因沉默，Lipofectamine�RNAiMAX仅在20 nM时表达较好，而在低浓度siRNA(分别为0.5和1.0 nM)时表达较强。



图4。通过反向转染5.0 nM和1.0 nM的GFP siRNA, PepMute�转染试剂分别抑制了MCF7细胞(上图)和U2OS细胞(下图)中GFP的稳定表达。绿色荧光蛋白(GFP)在MCF7和U2OS细胞中稳定表达。将靶向GFP基因的siRNA(右图)和伪siRNA(左图)分别导入MCF7和U2OS细胞，最终波长分别为5.0 nM和1.0 nM用转染试剂进行反转染。绿色荧光蛋白转染48h后用尼康荧光显微镜观察基因沉默情况。定量分析表明在MCF7和U2OS细胞中，通过PepMute�siRNA转染试剂在5.0和1.0 nM时分别抑制了90%和95%稳定表达的GFP。

数据表及协议
-标准siRNA转染协议
-标准siRNA/DNA共转染协议
-HTS的反向siRNA转染协议

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感言:

我在原代视网膜神经元上试用过你们的pepMute转染试剂，对转染效率很满意。将订单!